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Cell-Free Protein Synthesis Kit Max (Lyophilized)
無細胞蛋白合成試劑盒（二硫鍵增強版凍干粉）

產(chǎn)品貨號：
  • EG25304S
  • EG25304M
產(chǎn)品規(guī)格：
20 rxns
產(chǎn)品價格：
￥2400
產(chǎn)品規(guī)格：
100 rxns
產(chǎn)品價格：
￥9600

產(chǎn)品介紹

       無細胞蛋白合成試劑盒（Cell-Free Protein Synthesis Kit）是一款基于大腸桿菌細胞裂解液進行體外蛋白質(zhì)合成的產(chǎn)品。該產(chǎn)品利用細胞裂解液中的核糖體、翻譯因子、酶等活性物質(zhì)，同時補加能量、核苷酸、氨基酸、無機鹽等，在體外重構轉(zhuǎn)錄-翻譯體系。以DNA或RNA為模板，表達出蛋白質(zhì)。無細胞蛋白表達是一種不依賴于活菌，能夠快速、靈活地大量表達蛋白質(zhì)，和傳統(tǒng)的重組表達體系相比有眾多的優(yōu)勢：
       1.蛋白表達快，1~2 h即可表達出目的蛋白，8~24 h即可達到最大量。
       2.蛋白表達量高，最高可達到3 mg/ml以上的蛋白。
       3.反應簡單靈活，僅需向反應體系中加入DNA或RNA模板，可使用96孔板或離心管進行反應。
注：本貨號產(chǎn)品可表達常規(guī)蛋白，更適用于表達含二硫鍵的蛋白。

產(chǎn)品組成

組分

規(guī)格S

規(guī)格M

Cell-free system solution A Max
(Lyophilized)

1瓶（復溶后300 μl）

1瓶（復溶后1.5 ml）

Cell-free system solution B
(Lyophilized)

1瓶（復溶后600 μl）

1瓶（復溶后3 ml）

CFPS-Control Plasmid

2 μg

2 μg

儲運條件

4℃運輸。
-20℃保存，有效期12個月。
凍干粉復溶后，-20℃保存不超過1個月，-80℃保存不超過12個月。
 

文件下載

相關問答

  • Q:

    使用本品表達其他蛋白，是不是根據(jù)提供的質(zhì)粒骨架進行替換 superfolder GFP 的CDS區(qū)域即可？

    A:

    表達其他蛋白時，只替換superfolder GFP會殘留N端的標簽，如果不需要標簽替換從ATG到TAA整個翻譯區(qū)。

  • Q:

    質(zhì)粒骨架的 T7 啟動子→T7 終止子以外的質(zhì)粒骨架序列是否可以替換？還是必須用您這邊的骨架序列？

    A:

    可以，例如pET9a、pET23a等質(zhì)粒也可以，重點是T7啟動子到T7終止子序列不建議替換，質(zhì)粒骨架可以換。

  • Q:

    T7 promoter后面到蛋白的CDS區(qū)域質(zhì)檢的 5’UTR序列是否是您這邊經(jīng)過優(yōu)化的？未進行標注的關鍵區(qū)域是否可以再進行序列優(yōu)化和替換？

    A:

    5’UTR是優(yōu)化的，不建議替換。T7啟動子到T7終止子區(qū)域不建議替換，如果該區(qū)域有優(yōu)化需求可自行嘗試優(yōu)化，其它區(qū)域都可以優(yōu)化和替換。

  • Q:

    加入模板DNA的最低濃度是多少？是否DNA模板加入量和蛋白表達效率相關？

    A:

    模板DNA濃度低于4 ng/μl，會降低表達量。模板DNA加入量和蛋白表達量有關，建議根據(jù)蛋白優(yōu)化，一般8 ng/μl左右就可以。

  • Q:

    相同模板的蛋白表達量組間差和批間差是否穩(wěn)定，是否有相關數(shù)據(jù)？

    A:

    相同模板的蛋白表達量組間差和批次差相對穩(wěn)定，偏差約10%~20%左右。

  • Q:

    無細胞表達與傳統(tǒng)大腸桿菌表達的區(qū)別是什么？

    A:

    對比項

    無細胞表達系統(tǒng)

    傳統(tǒng)細胞表達系統(tǒng)

    定義

    無細胞蛋白表達屬于體外反應系統(tǒng)，無需完整活細胞，直接利用細胞提取物（含核糖體、酶、tRNA、氨基酸等翻譯所需成分），在體外環(huán)境中完成轉(zhuǎn)錄和翻譯。

    傳統(tǒng)大腸桿菌表達依賴活的大腸桿菌細胞，通過將目的基因?qū)爰毎眉毎陨淼霓D(zhuǎn)錄、翻譯機制（體內(nèi)環(huán)境）合成蛋白。

    實驗流程

    模版制備→無細胞反應

    質(zhì)粒構建→轉(zhuǎn)化大腸桿菌→篩選陽性克隆→擴大培養(yǎng)→誘導表達→收集細胞→裂解純化

    耗費時間

    1~2 h 即可表達出目的蛋白，8~16 h 即可達到最大量

    時間數(shù)天到數(shù)周

    特殊蛋白表達

    可表達各種類型的蛋白，包括毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白或難溶蛋白

    毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白或難溶蛋白表達困難

    操作便捷性

    簡單快捷，開蓋即用，僅需加入 DNA 或 RNA 模板

    對實驗條件和操作技能要求高

    應用靈活性

    可使用 96 孔板或離心管進行反應，高通量篩選；修飾等更靈活

    難以實現(xiàn)高通量表達和篩選
  • Q:

    合成的蛋白質(zhì)可以使用哪些方法純化？

    A:

    可以使用鎳磁珠純化。

  • Q:

    是否需要在合成前純化質(zhì)粒或線性 DNA 模板？

    A:

    說明DNA的質(zhì)量對無細胞很關鍵，可以使用高品質(zhì)的質(zhì)粒小量制備試劑盒或 PCR 和 DNA 純化試劑盒。