精品推薦 I 耐高溫耐抑制劑逆轉(zhuǎn)錄酶

發(fā)布時(shí)間：2022-10-10 發(fā)布人：

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　　1970年，Temin 和 Baltimore 從逆轉(zhuǎn)錄病毒中發(fā)現(xiàn)了逆轉(zhuǎn)錄酶 (RTase)，它具有依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶 (RDDP)，依賴于 DNA 的 DNA 聚合酶 (DDDP) 以及切割 RNA-DNA 異源雙鏈的核糖核酸酶 H(RNase H) 三種活性。

　　幾十年來，RTase 已經(jīng)成為分子生物學(xué)中的一個(gè)關(guān)鍵工具，RTase 以 mRNA 為模板，由隨機(jī)引物、oligo(dT) 或基因特異性引物引導(dǎo)，合成互補(bǔ)的 DNA(complementary DNA，cDNA)，再以 cDNA 為模板，可擴(kuò)增出不含內(nèi)含子的基因序列。這樣將逆轉(zhuǎn)錄與 PCR 擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合，大大推動(dòng)了分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。

| 產(chǎn)品簡(jiǎn)介 |

　　M-MLV GIII Reverse Transcriptase 是通過基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代 M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對(duì)于野生型 M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶去除了 RNase H 活性，并大幅提高了熱穩(wěn)定性（最適反應(yīng)溫度為 50℃），從而大大提高了合成第一鏈 cDNA 時(shí)的特異性和長(zhǎng)度，增強(qiáng)了對(duì) RNA 復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的耐受性。

| 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) |

高純度，無核酸酶污染，無宿主 DNA 污染

溫度適應(yīng)范圍廣，42℃~65℃均可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

抑制劑耐受性強(qiáng)，對(duì)于 Trizol、SDS 等 RNA 提取中易于引入的污染具有更強(qiáng)的耐受能力

| 性能展示 |

1、無RNA酶污染殘留

M-MLV GIII Reverse Transcriptase（BE RTIII）和番茄RNA在37℃下孵育1h，孵育產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示RNA無明顯變化，即百時(shí)美逆轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)品中無RNase污染。

2、42-65℃下高效合成cDNA

分別使用百時(shí)美（BE）、A公司、B公司的逆轉(zhuǎn)錄酶，以RNA Marker為底物，在42℃、50℃、55℃、60℃和65℃不同溫度下，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系，反應(yīng)30min，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示百時(shí)美逆轉(zhuǎn)錄酶在更寬的溫度范圍內(nèi)有效合成長(zhǎng)達(dá)9Kb的cDNA產(chǎn)物。

3、最快10min即可反應(yīng)完成

分別使用百時(shí)美（BE）、A公司、B公司的逆轉(zhuǎn)錄酶，以RNA Marker為底物，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系和溫度，分別反應(yīng)10、20、30min，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示百時(shí)美逆轉(zhuǎn)錄酶10min即可有效合成長(zhǎng)達(dá)9Kb的cDNA產(chǎn)物。

4、適應(yīng)不同表達(dá)豐度基因

分別使用百時(shí)美（BE）、A公司、B公司的逆轉(zhuǎn)錄酶，以100ng Human RNA為模板，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系和溫度，并結(jié)合qPCR技術(shù)測(cè)試不同表達(dá)豐度基因逆轉(zhuǎn)錄合成效率。結(jié)果顯示不同表達(dá)豐度的基因，百時(shí)美逆轉(zhuǎn)酶均能夠有效的逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA產(chǎn)物。

5、GIII具有較好的抑制劑耐受性

分別使用百時(shí)美（BE）、A公司、B公司的逆轉(zhuǎn)錄酶，以100ng番茄RNA為模板，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系和溫度，并結(jié)合qPCR技術(shù)測(cè)試在含有Trizol、SDS等抑制劑時(shí)不同表達(dá)豐度基因逆轉(zhuǎn)錄合成效率。結(jié)果顯示百時(shí)美逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)上述抑制劑有較好的耐受性，競(jìng)品公司的產(chǎn)品均不耐受0.004%SDS。

| 應(yīng)用場(chǎng)景 |

　　可用于 First strand cDNA 合成、Second strand cDNA 合成、RNA primer extension、RT-PCR、RT-qPCR、RT-LAMP 和 cDNA 文庫構(gòu)建等。

| 訂購信息 |